Apesar do crescente conhecimento sobre as características dos diferentes tipos de câncer, incluindo o câncer colorretal (CCR), o desenvolvimento de tratamentos efetivos tem sido limitado. O objetivo deste estudo foi verificar o efeito antitumoral do alcaloide indólico kopsanona. Para isso, foram utilizadas as linhagens celulares derivadas de adenocarcinoma Caco-2 e de carcinoma de cólon humano HCT-116. Inicialmente, foi realizada a análise de citotoxicidade da kopsanona pelo ensaio de MTT, e observamos que esse composto reduziu a viabilidade apenas de células HCT-116. Em seguida, observamos, pela coloração com azul de tripan e por citometria de fluxo, que a kopsanona não induziu morte das duas linhagens celulares, mas, conforme indicado pelo ensaio de coloração com cristal violeta, reduziu a proliferação de células HCT-116, sem indução de parada no ciclo celular. Além disso, a kopsanona induziu a formação de micronúcleos nessas células, conforme coloração com DAPI, e inibiu a formação de colônias, mas não reduziu o seu crescimento independente de ancoragem. Em adição, nossos dados também mostraram o aumento da expressão e da distribuição citosólica das proteínas de Junções Aderentes (JAs) E-caderina e β-catenina em células HCT-116, por western blotting e por imunofluorescência, respectivamente. Também, ensaios de fluorêscencia mostraram que a kopsanona diminuiu a formação de fibras de estresse e reduziu a migração de células HCT-116, conforme mostrado na técnica de wound healing, apesar de alterações na medida de impedância e na invasão celular não terem sido observadas. Por último, a kopsanona alterou a secreção de mediadores inflamatórios relacionados com a progressão tumoral em ambas as linhagens celulares. Juntos, esses resultados indicam que a kopsanona reduz a viabilidade de células tumorais invasivas através da indução da formação de micronúcleos e diminuição da proliferação celular, além de reduzir a migração celular através da redução de fibras de estresse. Ainda, podemos especular que esse alcaloide modula as JAs para regular a proliferação e a migração celular. Esses dados mostram os mecanismos celulares e moleculares do efeito antitumoral da kopsanona e podem contribuir para o seu potencial uso como alternativa terapêutica do câncer de cólon.
ABSTRACT - Despite increasing knowledge about characteristics of different types of cancer, including colorectal cancer (CRC), the development of effective treatments has been limited. The aim of this study was to verify the antitumor effect of indole alkaloid kopsanone. To do this, we used cell lines derived from human colon adenocarcinoma Caco-2 and carcinoma HCT-116. Initially, kopsanone cytotoxicity analysis was performed by the MTT assay, and we observed that this compound reduced the viability of HCT-116 cells. Next, we observed, by tripan blue staining and flow cytometry, that kopsanone did not induce death of the two cell lines but, as indicated by the violet crystal staining assay, reduced the proliferation of HCT-116 cells, without induction of cell cycle arrest. In addition, DNA staining with DAPI indicated that kopsanone induced micronucleus formation in these cells. Besides, kopsanone inhibited colony formation, but did not reduce HCT-116 anchorage independent growth. Furthermore, we observed increased expression and cytosolic distribution of Adherent Junctions (AJs) proteins E-cadherin and β-catenin in HCT-116 cells, by western blotting and immunofluorescence, respectively. Also, fluoroscence assays showed that kopsanone decreased stress fibers formation and reduced migration of HCT-116 cells, as shown by the wound healing technique, although changes in impedance measurement and cell invasion
were not observed. Finally, kopsanone altered the secretion of inflammatory mediators related to colon tumor progression in both cell lines. Together, these results indicate that kopsanone reduces invasive tumor cells viability through induction of micronucleus formation and by decreasing cell proliferation, as well as reduces cell migration by reduction of stress fibers. Still, we can speculate that kopsanone modulates AJs to regulate both, proliferation and migration. These data show cellular and molecular mechanisms of the antitumor effect of kopsanone and may contribute to its potential use as a therapeutic alternative to colon cancer.
